Immunológiai vizsgálatok áramlási citométerrel

Bizonyos nem kifejlődött (progenitor) sejtek felszínén található egy CD34-nek nevezett fehérje, melyhez összetett cukormolekulák is kapcsolódnak. Ezért a CD34-et a sejtfelszíni glikoproteinek közé sorolják. Funkció tekintetében, a CD34 fehérjét tartalmazó sejtek (CD34 pozitív sejtek, CD34+) részben a molekula segítségével kapcsolódnak külső környezetükhöz (szöveti matrix).
A CD34+ sejtek a fehérvérsejt fejlődés korai szakaszában levő, vérképző sejt alakok (hematopoietic progenitor sejt). Önmegújításra és a vérképzés sejttípusainak a kialakítására képesek. A CD34+ sejteket nevezik őssejteknek is. Nagy számban fordulnak elő a vörös csontvelőben és a köldökzsinór vérben. CD34+ sejteket az említett két helyhez képest, kisebb mennyiségben, a perifériás vérmintákban is megtalálhatók. Egyéb szöveti sejteken való előfordulásuk arra utal, hogy az adott CD34+ sejt egy szöveti őssejt.
Az őssejtekben gazdag vérkészítményeket sejtterápia céljára használják. Lehet frissen felhasználni, vagy felhasználásig fagyasztva tárolni őket. Az eredettől és felhasználástól függetlenül ismerni kell, hogy adott minta mennyi CD34+ sejtet tartalmaz. Ez a szám határozza meg, hogy a sejtterápia során az őssejtben gazdag vérmintából hány millilitert kell felhasználni.
Bizonyos terápiás beavatkozások a vérben keringő őssejtek számának a növekedését ígérik a betegeknek. Az ilyen terápia megkezdése előtt, illetve közben, a hatékonyság objektív megítélése szempontjából fontos ismerni a keringő vér CD34+ sejtek számát. Így követhető, hogy a kezelés ténylegesen megemelte-e a keringő CD34+ sejtek mennyiségét.
 
A CD34+ sejtek mennyiségi meghatározása. A vizsgálathoz kis mennyiségű perifériás vénás vérmintára van szükség. A vérminta néhányszor 10 mikroliter térfogatához olyan fluoreszkáló festékmolekulát tartalmazó fehérjét adnak (fluorochrom labeled CD34 antibody), amely kizárólag a CD34 fehérjéhez kötődik. Ez a specifikus kötődés biztosítja, hogy csak a CD34 fehérjét tartalmazó sejteket jelöljük meg. A megjelölt sejtek lézer megvilágítás hatására „világítanak”, míg a nem jelöltek „sötétek” maradnak. Ezután a vérmintát felhelyezik az áramlási citométernek nevezett készülék mintavevő csövére. Az áramlási citométer lézerfénnyel megvilágít minden egyes fehérvérsejtet, amely az érzékelője előtt elhalad és automatikusan megszámolja a „festett”, tehát CD34+ sejteket. Így a többi, „sötét”, fehérvérsejthez képest meg lehet mondani, hogy mekkora a CD34+ sejtek százalékos aránya. Igény esetén a százalékos arány mellett a sejtek pontos darabszáma is megadható.

Kapcsolódó web helyek: